產(chǎn)品名稱：大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）ELISA Kit 
英文名稱：Rat tartrate-resistant acid phosphatase 5b,TRACP-5b ELISA Kit
產(chǎn)品分類：大鼠其它科研用ELISA試劑盒[Rat other ELISA Kit]
產(chǎn)品編號：E0902r
檢驗方法：ELISA
包 裝：96T

本試劑僅供研究使用

試驗原理：
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知AGEs濃度的標準品裁鸦、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將和生物素標記的抗體同時溫育拣壮。洗滌后虎北，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌呈缴，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物腋尘，然后加入底物A、B酌峻，和酶結(jié)合物同時作用盈综。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中濃度呈比例關(guān)系坊阎。

試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品：800ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標記的抗AGEs抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

自備材料
1． 蒸餾水垒土。
2． 加樣器：5ul、10ul嫁料、50ul、100ul昆淡、200锰瘸、500ul、1000ul昂灵。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等避凝。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B眨补。一旦接觸到這些液體管削，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝撑螺、抽煙或使用化妝品含思。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
1． 試劑應按標簽說明書儲存甘晤，使用前恢復到室溫含潘。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存线婚。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中遏弱，密封保存，以免變質(zhì)塞弊。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好差齐。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用耘炭。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染气弥，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器故厕。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液适唆。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干萧揩，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水榛娶。
7． 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子泊鹿。底物B對光敏感堰漾，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸蒙棱，有毒就餐。實驗完成后應立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應*故觅，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣厂庇。
9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作输吏。

樣品收集权旷、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激贯溅。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管拄氯。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離它浅。
2译柏、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽姐霍、肝素血漿可用于檢測鄙麦。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3镊折、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物黔衡。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎沸芍。1000×g離心10分鐘雨冒，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用累变，應將其分成小部分-70 ℃保存扛浸，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血囊弥。如果血清中大量顆粒濒陈，檢測前先離心或過濾唁狼。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍嘶遏。

試劑的準備
1． 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備铁魁，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻宰爆。稀釋比例按下表中進行：
800 ng/ml （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul酵毕。
400 ng/ml （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 ng/ml （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 ng/ml （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 ng/ml （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 ng/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋蟆豫。

操作步驟
1． 使用前议忽，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫十减，以免加樣時加入大量的氣泡栈幸，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)帮辟。每個標準品和空白孔建議做復孔速址。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔由驹。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)壳繁。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)荔棉。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板蒿赢，輕輕振蕩混勻润樱，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內(nèi)液體羡棵，每孔加滿洗滌液壹若，振蕩30秒，甩去洗滌液鹤莹，用吸水紙拍干绰蚁。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌坑遥，洗滌次數(shù)增加一次嘁汞。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻剧廓，37℃溫育30分鐘凰侈。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液馍丑，振蕩30秒郎丰，甩去洗滌液吩饶，用吸水紙拍干。重復此操作3次洛惹。如果用洗板機洗滌唯乃，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A奋构、B各50ul壳影，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘声怔。避免光照态贤。
8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液醋火，加入終止液后應立即測定結(jié)果悠汽。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案
 標準品濃度（ng/ml）
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的芥驳，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結(jié)果柿冲。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性兆旬。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990假抄。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內(nèi)丽猬、板間變異系數(shù)均小于10%宿饱。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2脚祟、以吸光度OD值為縱坐標（Y）丐吹，相應的AGEs標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線烂攒，樣品的AGEs含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度性聚。

3、檢測值范圍：0-800ng/ml

4筝贮、敏感度： 1.0 ng/ml