試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：96IU/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進(jìn)行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標(biāo)記的抗CA724抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（60ml） 1瓶（30ml） 按說明書進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

自備材料
1． 蒸餾水僵控。
2． 加樣器：5ul、10 ul图柏、50 ul序六、100 ul、200蚤吹、500 u拒吧、1000lul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等泡募。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A描蹦、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗仆阶。
2． 實驗中不要吃喝筝踢、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份驯祖。

操作注意事項
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存彰碑，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄彪御，不可保存详般。
2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存筋顽，以免變質(zhì)玷利。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用哪自。保質(zhì)前使用丰包。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染禁熏，吸取終止液和底物A壤巷、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器瞧毙。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液胧华。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干宙彪，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水矩动。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子释漆。底物B對光敏感悲没，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸男图，有毒示姿。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應(yīng)*揭凭，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣源快。
9． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作俯重。

樣品收集炫瘤、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激夕锹。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管枷配。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2物少、 血漿-----EDTA爪撤、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測棚疏。1000×g離心30分鐘去除顆粒网燃。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物继溯。
4雄炕、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存需忿，避免反復(fù)冷凍诅炉。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒屋厘，檢測前先離心或過濾涕烧。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍汗洒。

試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備议纯，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻溢谤。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
96 IU/ml （6號標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul瞻凤。
48 IU/ml （5號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
24 IU/ml （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12 IU/ml （3號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6.0 IU/ml （2號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3.0 IU/ml （1號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 IU/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩沖液（20×）的稀釋：蒸餾水20倍稀釋世杀。

操作步驟
1． 使用前阀参，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫瞻坝，以免加樣時加入大量的氣泡蛛壳，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)牢簸。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔骨矗。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔碘淘。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔刮血、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體惰采。蓋上膜板颂鞭，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時栋锣。
4． 甩去孔內(nèi)液體刑袒，每孔加滿洗滌液涤墙，振蕩30秒，甩去洗滌液程悼，用吸水紙拍干惯缚。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌诬像，洗滌次數(shù)增加一次屋群。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻坏挠，37℃溫育30分鐘芍躏。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液降狠，振蕩30秒对竣，甩去洗滌液，用吸水紙拍干榜配。重復(fù)此操作3次否纬。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次蛋褥。
7． 每孔加入底物A临燃、B各50ul，輕輕振蕩混勻壁拉，37℃溫育10分鐘谬俄。避免光照柏靶。
8． 取出酶標(biāo)板弃理，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果铛田。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值挂蹦。

建議使用的實驗方案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃度（IU/ml） 
A 96 96 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 48 48 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 24 24 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 12 12 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 6.0 6.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 3.0 3.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

結(jié)果分析
以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的CA724 標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）嚣历，做得相應(yīng)的曲線叼叙，樣品的CA724 含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的盟挤，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果么酪。

試劑盒性能
1． 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性腻俏。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990长尼。
2． 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3． 重復(fù)性：板內(nèi)目尘、板間變異系數(shù)均小于10%瞻替。