預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測定人血清咙好、血漿蔗须、細胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體中腫瘤特異生長因子（TSGF）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測定標(biāo)本中TSGF水平命丑。用純化的抗體包被微孔板玛耿，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入TSGF君订、生物素化的抗人TSGF抗體漱蔬、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色溪失。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色语诈，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TSGF呈正相關(guān)桃逆。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）察颅，計算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔）
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶贫莹，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml兢糯，蓋好后靜置10分鐘以上心唆，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為10000 pg/ml勘天，做系列倍比稀釋后怔揩，分別稀釋成10000 pg/ml，5000 pg/ml 脯丝，2500 pg/ml商膊，1250 pg/ml，625 pg/ml宠进，312 pg/ml晕拆，156 pg/ml，其原液直接作為zui高標(biāo)準(zhǔn)濃度材蹬，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml实幕，臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制5000 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml 10000 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中堤器，混勻即可昆庇，其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液：1×20ml/瓶闸溃。
4. 檢測稀釋液A：1×10ml/瓶整吆。
5. 檢測稀釋液B：1×10ml/瓶。
6. 檢測溶液A：1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測稀釋液A 1：100稀釋啥诈，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100ul）绎揭，實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制专稼，輕輕混勻叉室，在使用前一小時內(nèi)配制。
7. 檢測溶液B：1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測稀釋液B1：100稀釋缰嘴。稀釋方法同檢測溶液A布撑。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶马窘，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）铜殉。
標(biāo)本的采集及保存
1．細胞培養(yǎng)物上清：請離心后收集上清寡专，并將標(biāo)本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融郊察。
2．血清：標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘茧伍，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存酷窥，但應(yīng)避免反復(fù)凍融咽安。
3．血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑伴网，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存妆棒，但應(yīng)避免反復(fù)凍融澡腾。
注：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測糕珊。
操作步驟
各試劑在使用前平衡至室溫动分。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔红选、待測樣品孔澜公。除空白孔外，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測樣品100ul喇肋，注意不要有氣泡坟乾，輕輕混勻，酶標(biāo)板加上蓋蝶防，37℃反應(yīng)120分鐘甚侣。
2. 棄去液體，甩干垫暑，不用洗滌舆骚。
3. 每孔加檢測溶液A工作液 100ul，37℃,60分鐘蔚分。洗板3次悉歼，350ul/每孔，甩干碟舱。
4. 每孔加檢測溶液B工作液 100ul洁操，37℃，60分鐘俗循，洗板5次蛋揖，甩干。
5. 依序每孔加底物溶液90ul诀汁，37℃避光顯色30分鐘（此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色溶孽，后3-4孔梯度不明顯）。
6. 依序每孔加終止溶液50ul探悲，終止反應(yīng)（此時蘭色立轉(zhuǎn)黃色）沽怪。用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。
注：
1． 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔姿锭，該孔不加任何試劑塔鳍，只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零呻此。
2．為防止樣品蒸發(fā)轮纫，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)腔寡。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙掌唾，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次放前；將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘郑兴，根據(jù)需要犀斋，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機情连，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中叽粹。
特異性
    本試劑盒可同時檢測重組或天然的人TSGF，且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)却舀。
計算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)）盼饼，OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線了灾，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度豺啦；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式胖直，將樣品的OD值代入方程式肛劈，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)腋民，即為樣品的實際濃度遗时。
注意事項
1． 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性项起。
2． 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)皆墅，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣廊珊。
3． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線灵您，做復(fù)孔。
4． 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高答倡，請先稀釋后再測定轰传，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
5．在配制標(biāo)準(zhǔn)品瘪撇、檢測溶液工作液時获茬，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆设江。
6．底物請避光保存锦茁。
檢測范圍：
156 pg/ml -10000 pg/ml
說明
1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）攘轩；2-8℃（頻繁使用時）叉存。
2．有效期：6個月
3．濃洗滌液會有鹽析出码俩，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)歼捏，此為正掣宕妫現(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響瞳秽。
5．中瓣履、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準(zhǔn)练俐。