試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：96IU/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進(jìn)行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標(biāo)記的抗CA724抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（60ml） 1瓶（30ml） 按說明書進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

自備材料
1． 蒸餾水入客。
2． 加樣器：5ul自阱、10 ul嚎莉、50 ul、100 ul沛豌、200趋箩、500 u、1000lul琼懊。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等阁簸。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B掩纺。一旦接觸到這些液體伏嬉，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝炼注、抽煙或使用化妝品怕翘。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存方数，使用前恢復(fù)到室溫辞镇。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存询烤。
2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中忙甩，密封保存，以免變質(zhì)旷酗。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好揉罗。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用星嗜。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染掷情，吸取終止液和底物A软吐、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器吟税。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液凹耙。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干肠仪，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水肖抱。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子藤韵。底物B對光敏感虐沥，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸泽艘，有毒欲险。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應(yīng)*匹涮，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣天试。
9． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作然低。

樣品收集喜每、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激拘挖。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管找鹅。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離挑画。
2轩从、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽猎肄、肝素血漿可用于檢測融沟。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3欠住、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物浮烫。
4、 保存------如果樣品不立即使用揉民，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存杆荐，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血鼎嫉。如果血清中大量顆粒诉濒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍循诉。

試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存撇他。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻茄猫。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
96 IU/ml （6號標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
48 IU/ml （5號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
24 IU/ml （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12 IU/ml （3號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6.0 IU/ml （2號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3.0 IU/ml （1號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 IU/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul困肩。

2． 洗滌緩沖液（20×）的稀釋：蒸餾水20倍稀釋划纽。

操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻锌畸。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫勇劣，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差潭枣。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)比默。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定盆犁，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔帅唬。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)蘸腾。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體噪怜。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻鸟焊，37℃溫育1小時予售。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液藕龄，振蕩30秒湿斩，甩去洗滌液，用吸水紙拍干抢坯。重復(fù)此操作3次丐浑。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次豫鲁。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP卓据，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘凛未。
6． 甩去孔內(nèi)液體捅位，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒搂抒，甩去洗滌液艇搀，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌焰雕，洗滌次數(shù)增加一次衷笋。
7． 每孔加入底物A、B各50ul矩屁，輕輕振蕩混勻辟宗，37℃溫育10分鐘。避免光照吝秕。
8． 取出酶標(biāo)板泊脐，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果烁峭。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值容客。

建議使用的實驗方案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃度（IU/ml） 
A 96 96 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 48 48 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 24 24 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 12 12 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 6.0 6.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 3.0 3.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

結(jié)果分析
以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的CA724 標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）挤毯，做得相應(yīng)的曲線蛙途，樣品的CA724 含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的蚊霞，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果睹协。

試劑盒性能
1． 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性姆盲。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990叁利。
2． 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3． 重復(fù)性：板內(nèi)盒咪、板間變異系數(shù)均小于10%完各。