產(chǎn)品名稱：大鼠血管緊張素原（aGT）ELISA Kit 
英文名稱：Rat angiotensinogen,aGT ELISA Kit
產(chǎn)品分類：大鼠其它科研用ELISA試劑盒[Rat other ELISA Kit]
產(chǎn)品編號：E0797r
檢驗方法：ELISA
包 裝：96T

本試劑僅供研究使用

試驗原理：
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知AGEs濃度的標準品妻往、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測稍浆。先將和生物素標記的抗體同時溫育载碌。洗滌后，加入親和素標記過的HRP衅枫。再經(jīng)過溫育和洗滌嫁艇，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A弦撩、B步咪，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色益楼。顏色的深淺和樣品中濃度呈比例關(guān)系歧斟。

試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品：800ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標記的抗AGEs抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul偏形、10ul静袖、50ul、100ul俊扭、200队橙、500ul、1000ul贝泞。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等淮辕。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B牡罚。一旦接觸到這些液體俯炮，請盡快用水沖洗冬溯。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品敦浅。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份录教。

操作注意事項
1． 試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫赛琢。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄字瘫，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中悴碳，密封保存借街，以免變質(zhì)。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好灾囊。不同批號的試劑不要混用听想。保質(zhì)前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染马胧，吸取終止液和底物A哗魂、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器漓雅。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液录别。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干邻吞，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水组题。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子抱冷。底物B對光敏感崔列，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸旺遮，有毒赵讯。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應(yīng)*耿眉，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣边翼。
9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作溅鞠。

樣品收集徽七、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激仙茴。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管蛹柔。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2电尖、 血漿-----EDTA奕碑、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測勺帜。1000×g離心30分鐘去除顆粒脆号。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物懒碍。
4葱妒、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎谚剿。1000×g離心10分鐘缝驳，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用归苍，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存用狱，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血拼弃。如果血清中大量顆粒夏伊，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍吻氧。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍溺忧。

試劑的準備
1． 標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存盯孙。稀釋前將標準品振蕩混勻鲁森。稀釋比例按下表中進行：
800 ng/ml （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 ng/ml （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 ng/ml （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 ng/ml （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 ng/ml （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 ng/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul振惰。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋歌溉。

操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻骑晶。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫痛垛，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差梁促。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)晚簇。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定猛屋，能使用復孔的盡量做復孔峡逆。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔钩榄、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)念弧。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻依播，37℃溫育1小時口愁。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液娱必，振蕩30秒鸿挠，甩去洗滌液，用吸水紙拍干姻蚓。重復此操作3次宋梧。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次狰挡。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP捂龄，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘加叁。
6． 甩去孔內(nèi)液體倦沧，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒它匕，甩去洗滌液展融，用吸水紙拍干。重復此操作3次豫柬。如果用洗板機洗滌告希，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A烧给、B各50ul燕偶，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘抱典。避免光照衔耕。
8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液绵另，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果悬鲜。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案
 標準品濃度（ng/ml）
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的姨莽，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結(jié)果厉源。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性仲侈。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990豆蝠。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復性：板內(nèi)秆惑、板間變異系數(shù)均小于10%赛羡。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1衍止、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y）词祝，相應(yīng)的AGEs標準品濃度為橫坐標（X）园担，做得相應(yīng)的曲線，樣品的AGEs含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度枯夜。

3弯汰、檢測值范圍：0-800ng/ml

4、敏感度： 1.0 ng/ml