產(chǎn)品名稱：人蛋白聚糖（PG）ELISA Kit 
英文名稱：Human Proteoglycan,PG ELISA Kit
產(chǎn)品分類：人其它科研用ELISA試劑盒[Human other ELISA Kit]
產(chǎn)品編號：E1059h
檢驗方法：ELISA
包 裝：96T

本試劑僅供研究使用

試驗原理：
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知AGEs濃度的標準品止喷、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將和生物素標記的抗體同時溫育违霞。洗滌后嘴办，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌买鸽，去除未結合的酶結合物涧郊，然后加入底物A、B眼五，和酶結合物同時作用底燎。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中濃度呈比例關系弹砚。

試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品：800ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標記的抗AGEs抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

自備材料
1． 蒸餾水双仍。
2． 加樣器：5ul、10ul虫棚、50ul辽画、100ul、200黔琢、500ul阀恳、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等寻癌。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A薇榨、B。一旦接觸到這些液體绪封，請盡快用水沖洗魏颠。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品历扭。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份软苗。

操作注意事項
1． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄心爷，不可保存现恼。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存黍檩，以免變質(zhì)叉袍。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用刽酱。保質(zhì)前使用畦韭。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A肛跌、B液時艺配，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液衍慎。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品转唉。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水稳捆。
7． 底物A應揮發(fā)赠法，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感乔夯，避免長時間暴露于光下猴宾。避免用手接觸，有毒醇疮。實驗完成后應立即讀取OD值漆埋。
8． 加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣巴移。
9． 按照說明書中標明的時間您窒、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集瞭驴、處理及保存方法
1翻萨、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管退钱。收集血液后俄蔗，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2欠诊、 血漿-----EDTA蛀漆、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測切省。1000×g離心30分鐘去除顆粒最岗。
3帕胆、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物朝捆。
4般渡、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘芙盘，取上清液
5驯用、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存儒老，避免反復冷凍蝴乔。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒驮樊，檢測前先離心或過濾薇正。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍囚衔。

試劑的準備
1． 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備挖腰，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻练湿。稀釋比例按下表中進行：
800 ng/ml （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul场时。
400 ng/ml （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 ng/ml （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 ng/ml （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 ng/ml （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 ng/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋谴疾。

操作步驟
1． 使用前强进，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫昭怕，以免加樣時加入大量的氣泡袱族，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)裙都。每個標準品和空白孔建議做復孔玩困。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔牧俩。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)脉鼻。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)妨迈。立即加入50ul的生物素標記的抗體度姑。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻呈枉，37℃溫育1小時趁尼。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液猖辫，振蕩30秒酥泞，甩去洗滌液砚殿，用吸水紙拍干。重復此操作3次芝囤。如果用洗板機洗滌似炎，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP悯姊，輕輕振蕩混勻羡藐，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體悯许，每孔加滿洗滌液仆嗦，振蕩30秒，甩去洗滌液先壕，用吸水紙拍干瘩扼。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌熊赦，洗滌次數(shù)增加一次农幢。
7． 每孔加入底物A、B各50ul诵城，輕輕振蕩混勻绪忙，37℃溫育10分鐘。避免光照慷组。
8． 取出酶標板肘渔，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果溢棱。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值繁莲。

建議使用的實驗方案
 標準品濃度（ng/ml）
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結果吩伊。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品拢胆。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990便螟。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應猛计。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%爆捞。

結 果 判 斷 與 分 析
1奉瘤、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y）煮甥，相應的AGEs標準品濃度為橫坐標（X）盗温，做得相應的曲線，樣品的AGEs含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度成肘。

3卖局、檢測值范圍：0-800ng/ml

4斧蜕、敏感度： 1.0 ng/ml