產(chǎn)品名稱：人多巴色素異構酶（DT）ELISA Kit 
英文名稱：Human dopachrome tautomerase,DT ELISA Kit
產(chǎn)品分類：人其它科研用ELISA試劑盒[Human other ELISA Kit]
產(chǎn)品編號：E1066h
檢驗方法：ELISA
包 裝：96T

本試劑僅供研究使用

試驗原理：
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知AGEs濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測趾迈。先將和生物素標記的抗體同時溫育旷似。洗滌后，加入親和素標記過的HRP乔煞。再經(jīng)過溫育和洗滌吁朦，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A渡贾、B逗宜，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色空骚。顏色的深淺和樣品中濃度呈比例關系纺讲。

試劑盒內容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品：800ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標記的抗AGEs抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul府怯、10ul刻诊、50ul、100ul牺丙、200则涯、500ul、1000ul冲簿。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等粟判。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B吓缴。一旦接觸到這些液體寇淑，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝少迁、抽煙或使用化妝品兆婆。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
1． 試劑應按標簽說明書儲存遏貌，使用前恢復到室溫婿哥。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存获玻。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中酣矮，密封保存，以免變質缕兄。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好颅挟。不同批號的試劑不要混用。保質前使用弓洒。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染而芥，吸取終止液和底物A、B液時诽嘉，避免使用帶金屬部分的加樣器蔚出。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品虫腋。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干骄酗，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7． 底物A應揮發(fā)悦冀，避免長時間打開蓋子趋翻。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下盒蟆。避免用手接觸踏烙，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值历等。
8． 加入試劑的順序應*讨惩，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣辟癌。
9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作荐捻。

樣品收集滩哥、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激昨镊。使用不含熱原和內毒素的試管溃恼。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離梁捉。
2追粉、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽箍属、肝素血漿可用于檢測短硼。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3公上、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物枯昂。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎醒囊。1000×g離心10分鐘霸瘾，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用通熄，應將其分成小部分-70 ℃保存唆涝，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血唇辨。如果血清中大量顆粒廊酣，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍赏枚。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍亡驰。

試劑的準備
1． 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存饿幅。稀釋前將標準品振蕩混勻凡辱。稀釋比例按下表中進行：
800 ng/ml （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 ng/ml （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 ng/ml （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 ng/ml （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 ng/ml （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 ng/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul栗恩。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋透乾。

操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻磕秤。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫乳乌，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)赴碘。每個標準品和空白孔建議做復孔社衰。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔鸡视。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內稻漏。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內舍稽。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板言盼，輕輕振蕩混勻发液，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內液體筐成，每孔加滿洗滌液焊辈，振蕩30秒，甩去洗滌液谣皇，用吸水紙拍干势送。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌朴沿，洗滌次數(shù)增加一次猜谚。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻赌渣，37℃溫育30分鐘魏铅。
6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液坚芜，振蕩30秒览芳，甩去洗滌液，用吸水紙拍干鸿竖。重復此操作3次沧竟。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次缚忧。
7． 每孔加入底物A悟泵、B各50ul，輕輕振蕩混勻闪水，37℃溫育10分鐘魁袜。避免光照。
8． 取出酶標板逸渤，迅速加入50ul終止液筛毡，加入終止液后應立即測定結果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值骂间。

建議使用的實驗方案
 標準品濃度（ng/ml）
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號標準品以上的結果為非線性的敢铲，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結果鉴凸。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性垮软。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990驴涡。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內伊屈、板間變異系數(shù)均小于10%觅符。

結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2濒勤、以吸光度OD值為縱坐標（Y）深吠，相應的AGEs標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線屎唠，樣品的AGEs含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度桑孩。

3、檢測值范圍：0-800ng/ml

4框冀、敏感度： 1.0 ng/ml