產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)抗體 
英文名稱：transforming growth factor β1,TGF-β1 
產(chǎn)品分類：兔源抗體(基因/蛋白)[Rabbit antibody(gene/protein)]
產(chǎn)品編號：P2074Rb
檢驗(yàn)方法：WB IP等
包 裝：0.2ml

本試劑僅供研究使用

試驗(yàn)原理：
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知AGEs濃度的標(biāo)準(zhǔn)品弛饭、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育姆另。洗滌后喇肋，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌迹辐，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物蝶防，然后加入底物A、B袍城，和酶結(jié)合物同時作用叨斜。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中濃度呈比例關(guān)系篓翠。

試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：800ng/ml 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書進(jìn)行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
生物素標(biāo)記的抗AGEs抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說明書進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
標(biāo)本稀釋液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型

自備材料
1． 蒸餾水转隘。
2． 加樣器：5ul、10ul酥徽、50ul暑苍、100ul、200打气、500ul俗循、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等巡住。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A诀汁、B。一旦接觸到這些液體趴贝，請盡快用水沖洗探悲。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品看锉。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份姿锭。

操作注意事項(xiàng)
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫伯铣。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄呻此，不可保存轮纫。
2． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存焚鲜，以免變質(zhì)掌唾。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用忿磅。保質(zhì)前使用糯彬。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A葱她、B液時撩扒，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液吨些。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品搓谆。
6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水词羹。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)了灾，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感冒衍，避免長時間暴露于光下胖直。避免用手接觸，有毒搭屿。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值腋民。
8． 加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣探龟。
9． 按照說明書中標(biāo)明的時間项起、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集否癣、處理及保存方法
1廊珊、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管栏荷。收集血液后答倡，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2驴党、 血漿-----EDTA瘪撇、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測港庄。1000×g離心30分鐘去除顆粒倔既。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物鹏氧。
4渤涌、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎佩谣。1000×g離心10分鐘，取上清液
5实蓬、 保存------如果樣品不立即使用稿存，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍瞳秽。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒率翅，檢測前先離心或過濾练俐。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍疙铜。

試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時準(zhǔn)備锡锐，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻帅邮。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
800 ng/ml (6號標(biāo)準(zhǔn)品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul操椰。
400 ng/ml (5號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 ng/ml (4號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 ng/ml (3號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 ng/ml (2號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 ng/ml (1號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 ng/ml (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩沖液(50×)的稀釋：蒸餾水50倍稀釋比邮。

操作步驟
1． 使用前跌仗，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫货吊，以免加樣時加入大量的氣泡掩若，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)抠蕊。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔快鬓。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔姆迄。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)向楼。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)谐区。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體湖蜕。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻宋列，37℃溫育1小時重荠。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液虚茶，振蕩30秒戈鲁，甩去洗滌液，用吸水紙拍干嘹叫。重復(fù)此操作3次婆殿。如果用洗板機(jī)洗滌诈乒，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP婆芦，輕輕振蕩混勻怕磨，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體绣摹，每孔加滿洗滌液醇颗，振蕩30秒，甩去洗滌液辽嘹，用吸水紙拍干搭诬。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌漠阻，洗滌次數(shù)增加一次转傍。
7． 每孔加入底物A、B各50ul哮怯，輕輕振蕩混勻糜实，37℃溫育10分鐘。避免光照危漱。
8． 取出酶標(biāo)板错这，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果赐匕。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值川愤。

建議使用的實(shí)驗(yàn)方案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果碍讯。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品悬蔽。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990捉兴。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)蝎困。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%倍啥。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1禾乘、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y)虽缕，相應(yīng)的AGEs標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X)始藕，做得相應(yīng)的曲線，樣品的AGEs含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度氮趋。

3伍派、檢測值范圍：0-800ng/ml

4、敏感度： 1.0 ng/ml