qiagen血清/血漿核酸純化試劑盒
qiagen血清/血漿核酸純化試劑盒
erformance
分析血液中腫瘤特異性的胞外DNA片段和mRNA可對普通血液樣品進行特異性地腫瘤類型檢測慰乾。這些存在于血清或血漿中的游離核酸通常都是<1000 bp(DNA)或<1000 nt(RNA)的片段昵慌。此外寻币,小至21 nt的miRNAs可作為某些癌癥和疾病狀態(tài)的生物標記。
QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit可從人類血漿熏版、血清和其他無細胞體液中高效純化游離核酸爬早。純化效率高、重現(xiàn)性好番搅、產量高(參見"Reproducible recovery of circulating DNA")代徒。應用延長的上樣管和真空裝置QIAvac 24 Plus可將樣品處理量提至5 ml,洗脫體積可在20–150 μl之間靈活變化瘸拳,可濃縮低濃度核酸昔黍。 該試劑盒采用*的技術,硅膠膜選擇性的結合目標核酸眠乏,提高片段化核酸的回收率(參見"Improved recovery of fragmented DNA")伴糟。
使用RNase-Free DNase Set進行DNA柱上消化,純化獲得不含DNA的游離RNA 羽傻。特別設計的流程確保高效純化諸如miRNA等小RNA(參見"Efficient purification of circulating miRNA")壮焰。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit高效純化甲基化DNA,經純化的DNA維持其甲基化狀態(tài)法厢,可進行亞硫酸氫鹽轉化實驗榴蜻,進行甲基化狀態(tài)分析(參見"Efficient recovery of methylated DNA")。
經純化和濃縮的游離DNA和RNA不含蛋白炎蹬、核酸酶和其他雜質瞎喉,可即用于各種下游應用,包括:
PCR 和定量real-time PCR以及RT-PCR
用于基于血液樣品的癌癥生物標記的研究竭沫、驗證和檢測
病毒核酸檢測
回收游離DNA燥翅。
在24個血漿樣本中加入同等量的DNA片段(200 bp和1000 bp)。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit從5 ml血漿中純化DNA蜕提,洗脫體積為80 μl森书。使用QuantiTect Multiplex PCR Kit對每個DNA片段特異性的66 bp靶點進行雙重real-time PCR,定量DNA的產量谎势。
回收片段化DNA凛膏,表現(xiàn)更出色。
使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit從5 ml血漿中純化游離DNA脏榆,或者使用QIAamp MinElute Virus Vacuum Kit從200 μl血漿中純化游離DNA猖毫,洗脫體積為100 μl。使用QuantTect Multiplex PCR Kit對18S rRNA基因內的66 bp擴增片段和500 bp擴增片段進行雙重real-time PCR须喂,定量DNA的產量吁断。500 bp擴增片段和66 bp擴增片段的擴增差異顯示DNA被片段化,從而導致完整的500 bp目標序列的豐度低于較短的66 bp靶點坞生。(請注意差異大于五倍樣本輸入體積差異)仔役。
高效純化游離miRNA妒贞。
使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit從4 ml采集血漿中純化游離DNA,洗脫體積為50 μl惠所。將標準試劑盒實驗方案與適用于miRNA的實驗方案進行比較剑银。使用TaqMan microRNA Assay(Applied Biosystems)定量miRNA 30b的產量,使用Human miScript Assay(QIAGEN)定量miRNA 16的產量更掺。采用miRNA實驗方案獲得的CT值較低嫩玻,表示miRNA的產量更高。
高效回收甲基化DNA客惨。
使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit從4 ml血漿中純化加入的甲基化DNA和非目標poly-A RNA尘腕,洗脫體積為45 μl。使用EpiTect Bisulfite Kit(QIAGEN)進行亞硫酸氫鹽轉化践赁,使用real-time MSP分析和QuantiTect Multiplex PCR Kit組分在ABI PRISM 7900HT Sequence Detection System上進行甲基化特異性PCR(MSP)摸马。對兩個全甲基化位點數據進行分析。