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范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶褒醒、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基異噁唑殘留量的液相色譜測定方法藕各。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶焦除、磺胺二甲基嘧啶和磺胺甲基異噁唑殘留量的測定座韵，其它磺胺類藥物的測定可以參照本標(biāo)準(zhǔn)。

規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款踢京。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)宦棺，然而瓣距，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的版本黔帕。凡是不注日期的引用文件，其版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)蹈丸。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

原理

用乙酸乙酯提取成黄，稀鹽酸反提取，正己烷脫脂逻杖，熒光胺衍生奋岁，反相色譜柱分離，熒光檢測器檢測荸百，磺胺5-甲氧嘧啶為內(nèi)標(biāo)物槽邮，內(nèi)標(biāo)法定量。

試劑

本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑在磺胺類藥物出峰處應(yīng)無干擾峰债竖，實驗用水應(yīng)符合GB/T6682中一級水標(biāo)準(zhǔn)调捍。

標(biāo)準(zhǔn)品：磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶姨猖、磺胺二甲基嘧啶吃它、磺胺甲基異噁唑，磺胺5-甲氧嘧啶漆逐，純度均大于98.0%驼凌。

丙酮：色譜純。

正己烷：色譜純撬替。

乙酸乙酯：色譜純唾姊。

乙腈：色譜純。

甲醇：色譜純防苗。

熒光胺：純度大于99.0%羽址。

乙酸鈉：分析純。

冰乙酸：優(yōu)級純谋旦。

鹽酸溶液：2mol/L剩失，量取180mL鹽酸，加適量水并稀釋至1000mL册着。

乙酸鈉溶液：3.5mol/L拴孤，稱取28.7g無水乙酸鈉溶于蒸餾水中，定容至100mL甲捏。

熒光胺溶液：2mg/L演熟，稱取0.03g熒光胺，加15mL丙酮司顿，振搖至*溶解芒粹，存放在暗處。現(xiàn)配現(xiàn)用大溜。

標(biāo)準(zhǔn)儲備液：100mg/L化漆，稱取標(biāo)準(zhǔn)品10mg(稱準(zhǔn)至0.1mg)估脆，用甲醇溶解并定容至100mL。避光冷藏保存座云，保存期為一個月疙赠。

混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：1mg/L，移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液各1.00mL离春，用甲醇稀釋并定容至100mL鼠废，在室溫下混勻。

內(nèi)標(biāo)儲備液：100mg/L集圈，稱取磺胺5-甲氧嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品10mg(稱準(zhǔn)至0.1mg)络蜘，用甲醇溶解并定容至100mL。避光冷藏保存肺致，保存期為一個月指锉。

內(nèi)標(biāo)中間液：1mg/L，移取內(nèi)標(biāo)儲備液1.00mL哈涣，用甲醇稀釋并定容至100mL吹对，在室溫下混勻。

混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液20μL勺处、40μL暮戏、100μL、200μL痪酸、400μL垃散，分別加入內(nèi)標(biāo)中間液100μL，用2mol/L鹽酸(4.10)稀釋至2mL授嘀，配成濃度分別為0.01mg/L物咳、0.02mg/L、0.05mg/L蹄皱、0.10mg/L览闰、0.20mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，其中內(nèi)標(biāo)濃度為0.05mg/L巷折。

儀器與設(shè)備

液相色譜儀：配熒光檢測器压鉴。

電子天平：感量0.0001g。

電子天平：感量0.01g锻拘。

高速組織搗碎機(jī)油吭。

均質(zhì)機(jī)。

離心機(jī)署拟。

旋渦混勻器婉宰。

氮吹儀。

往復(fù)式振蕩器。

聚丙烯離心管：15mL芍阎、50mL世曾。

容量瓶：10mL、20mL冈瞪、50mL、100mL凹田、200mL找仙、500mL、1000mL链坝。

玻璃移液管：1mL亲敷、2mL、5mL饿婴、10mL卒割。

巴斯德吸管。

色譜條件

色譜柱：ODS-C18腌馒，5μm堂憔，4.6mm×250mm，或同類型號色譜柱掐划。

柱溫：45℃奥猎。

流動相：乙腈 乙酸溶液(38 62)，500mL水中加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH至3.0配制成乙酸溶液掸屡。

流速：1mL/min

進(jìn)樣量：20μL封寞。

激發(fā)波長：405nm。

發(fā)射波長：495nm仅财。

步驟分析

樣品制備

從原始樣品中取出部分有代表性的樣品狈究，高速組織搗碎機(jī)搗碎。四分法縮分出不少于500g樣品盏求，混勻抖锥，均分成兩份。裝入清潔容器风喇，加封宁改，標(biāo)明標(biāo)記。-18℃以下冷凍保存魂莫。

提取

將樣品解凍还蹲，稱取2.00g，置于50mL聚丙烯離心管耙考，加入磺胺5-甲氧嘧啶標(biāo)準(zhǔn)中間液(4.16)100μL谜喊，用玻璃棒攪勻，再加乙酸乙酯10mL，均質(zhì)機(jī)14000rpm均質(zhì)1min巨陌，往復(fù)式振蕩器振動10min蔼邓，3000rpm離心10min，將乙酸乙酯層小心轉(zhuǎn)移到15mL具塞刻度試管中巡抛，40℃以下氮氣吹至2mL侨懈。再向原離心管中加入乙酸乙酯10mL，旋渦混勻30s追艘，振動10min凄系，3000rpm離心10min，將乙酸乙酯層小心轉(zhuǎn)移到原15mL具塞刻度試管中娇符，40℃以下氮氣吹至5mL量票。然后在試管中加入2.00mL2mol/L的鹽酸溶液，旋渦混勻1min遂撮，加蓋后振動10min来讯，3000rpm離心8min，用巴斯德吸管移去乙酸乙酯層壳坪，在余液中加入正己烷5mL舶得，旋渦混勻30s，3000rpm離心8min弥虐，用巴斯德吸管移去正己烷層扩灯，0.45μm微孔濾膜過濾，濾液備用霜瘪。

衍生

向樣品瓶中加入200μL混合標(biāo)準(zhǔn)使用液或樣品提取液珠插、200μL乙酸鈉溶液和80μL熒光胺溶液，旋渦混勻30s颖对，20min后供液相色譜分析捻撑。

色譜分析

取衍生后的樣品提取液20μL進(jìn)樣，記錄峰面積缤底，響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)顾患。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時間定性，內(nèi)標(biāo)法定量个唧〗猓磺胺類藥物色譜分析圖參見附錄A。

工作曲線

稱取空白樣品2.00g徙歼，分別添加混合標(biāo)準(zhǔn)中間液(4.14)20μL废筒、40μL、100μL捆牍、200μL棉挤、400μL绳粮，樣品中每種磺胺殘留量分別為0.01mg/kg、0.02mg/kg岳扒、0.05mg/kg需天、0.10mg/kg、0.20mg/kg掘叫，按7.2猩禀、7.3、7.4操作郁秦，以磺胺峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值為縱坐標(biāo)喘茵，磺胺含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線能说。

計算

用色譜數(shù)據(jù)處理軟件或按下式計算樣品中磺胺殘留量：

式中：

X——樣品中磺胺殘留量，單位為毫克每千克(mg/kg)井辜；

s——樣品溶液中磺胺峰面積绎谦，單位為counts；

s1——樣品溶液中內(nèi)標(biāo)峰面積粥脚，單位為counts窃肠；

S——標(biāo)準(zhǔn)溶液中磺胺峰面積，單位為counts刷允；

S1——標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)峰面積冤留，單位為counts；

x——加標(biāo)樣品中磺胺殘留量树灶，單位為毫克每千克(mg/kg)纤怒。

方法回收率

濃度范圍為0.010mg/kg～0.10mg/kg時，回收率見回收率表天通。

回收率表

名稱

回收率

磺胺嘧啶

88.0%～111.8%

磺胺甲基嘧啶

90.0%～110.8%

磺胺二甲基嘧啶

91.0%～110.1%

磺胺甲基異噁唑

107.0%～116.7%

方法檢出限

本方法檢出限為0.010mg/kg泊窘。

精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的差值不得超過算術(shù)平均值的15%。