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維生素C又叫抗壞血酸(Ascorbicid)拙达,廣泛存在于植物組織中得稼,新鮮的水果腐蛀、蔬菜中含量較多。是一種水溶性小分子生物活性物質(zhì)回溺,也是人體需要量大的一種維生素盒音。維生素C具有還原性(其結(jié)構(gòu)式如圖1),可以與許多氧化劑發(fā)生氧化還原反應(yīng)馅而,因此可以利用其還原性測定維生素C的含量。目前食品中測定維生素C含量的方法主要有dian量法譬圣,是利用維生素C的氧化還原性為基礎(chǔ)的一種氧化還原方法瓮恭。岡其酸度不易把握dian需要標(biāo)定且易揮發(fā),而Vc不易穩(wěn)定保存厘熟,使測定結(jié)果易出現(xiàn)偏差屯蹦,且這種方法不適合微量分析;國標(biāo)GB/T6195-1986是采用2,6一二氯靛酚滴定法绳姨。利用樣品溶液由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)榉奂t色來辨別其滴定終點的到達(dá)登澜。但是多數(shù)水果、蔬菜樣品其提取液都具有一定的色澤而導(dǎo)致滴定終點不明顯飘庄,使測定準(zhǔn)確度降低脑蠕。另外還有熒光光譜分析法 J、紫外一可見分光度法措暗、色譜法稻沮、電化學(xué)法等,這些方法都存在著一定的局限性递蚪,如操作過程復(fù)雜谅沛,所用試劑不穩(wěn)定,速度慢朗玩、背景¨干擾大喳睬。近年來,建立的測定Vc的其他方法還有催化動力學(xué)和光度法相結(jié)合的方法即荞,及VC傳感器測定方法泥出,固定pH滴定法等。
該論文將對蔬菜尾疟、水果常用的維生素C含量的檢測方法進(jìn)行綜述甩高、比較。
1原子吸收分光光度法
利用原子吸收分光光度法問接測定維生素C的含量什偷,是利用維生素C可以與一些金屬離子發(fā)生氧化還原反應(yīng)霸督,通過測定反應(yīng)掉的金屬離子的量,進(jìn)而間接計算出維生素c的含量衅疙。
1.1以銀離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法
以銀離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法莲趣,是利用維生素C分子中的有二烯醇基具強還原性鸳慈,可被xiaosuan銀氧化為去氫維生素C,同時產(chǎn)生黑色銀沉淀
沉淀經(jīng)離心分離后喧伞,將分離得到的沉淀用xiaosuan溶解后走芋,再利用原子吸收分光光度計測定銀離子的含量,從而接測得維生素C含量潘鲫,具體測定方法如下:
配制一系列濃度的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液翁逞,依次吸取一定量的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液置于10mL離心管中,分別加入2mL(1mg/mL) Ag+標(biāo)準(zhǔn)溶液溉仑,然后加水使總體積為4mL挖函,搖勻,在室溫下避光放置35min離心分離棄去上清液浊竟,用2mL超純水洗滌沉淀3次怨喘,然后用l:1的濃xiaosuan3mL溶解沉淀,移入50mL的容量瓶中振定,加水稀釋至刻度必怜。噴入空氣-乙炔火焰分別測定其吸光度,以維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)城汹,以測得的吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線偷菩。后將處理過的待測樣按上述方法測定其維生素C含量。
上述方法巾維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品的配制都是利用2%的檸檬酸作為溶劑拄下,并在棕色瓶中保存稳嘁,原因是維生素C在溶液中不穩(wěn)定,遇氧氣齐犀、光托习、熱、堿性物質(zhì)易受破壞滥捣,而在適當(dāng)?shù)乃嵝詶l件下比較穩(wěn)定虏淋,用2%的檸檬酸溶液來配制維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液,減緩了維生素C被氧化的速度沦昆,同時消除了一定外界因素的十?dāng)_尸查,使得測定結(jié)果比較穩(wěn)定。
1.2 以銅離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法
文獻(xiàn)中報道了以銅離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法愿凶。該方法也是利用維生素C在酸性介質(zhì)中維生素C可將Cu2+定量的還原為Cu+竖伯,然后Cu+與SCN-反應(yīng)生成CuSCN沉淀,在高速離心機(jī)下有效地分離出CuSCN沉淀因宇,洗滌后再經(jīng)濃xiaosuan溶解七婴,用原子吸收法測定沉淀中的含銅量,即可推知樣品中維生素C的含量察滑。具體測定方法如下:
分別吸取1mL配制的含一定量維生素C的標(biāo)準(zhǔn)溶液(隨配隨用)(分別含維生素C 50打厘、100修肠、200、300户盯、400嵌施、500 µg)和樣品提取液,依次放置于已編號的15mL離心管中莽鸭,各加入1mLCuSO4飽和溶液吗伤、1mL濃度為2%硫氰酸銨溶液、0.5mL鹽酸-醋酸鈉緩沖液和0.5 mL飽和NaCl溶液充分混和硫眨,稍后離心分離足淆,棄去上層清液,小心地用少量水洗滌沉淀2~3次(注意每次用水不能超過1 mL)倡挚,加入0.5mLxiaosuan溶解后,轉(zhuǎn)移至lO0mL的容量瓶中加水定容至刻度線筷疹,搖勻蒸拦。分別用原子吸收分光光度計測定其含銅量,由所得的維生素C含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線瞳竖,可以得到相應(yīng)樣品的試驗結(jié)果蜘把。
該方法所得的試驗結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD在5%以內(nèi)加標(biāo)回收率在96.56%~100.67%,其精密度和準(zhǔn)確度均達(dá)到痕量分析要求乡捧。此方法的線性相關(guān)系數(shù)R=O 9989衅滞,表明相關(guān)性很好。
2紫外可見分光光度法
利用紫外分光光度法測定維生素C的含量是基于維生素c在紫外光區(qū)有特征吸收牵观,但是因為維生素C結(jié)構(gòu)中具有不飽和鍵抓惫,具有還原性,不易穩(wěn)定存在塌自,直接測定誤差較大径楼。所以在利用紫外分光光度法測定時,維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測樣的配制條件非常重要悟旧。曾國富嚼锄,黃玉英研究發(fā)現(xiàn),維生索C在CTAB-C5H11OH-H2O微乳液體系中非常穩(wěn)定蔽豺,它存在于微乳液滴膜的內(nèi)側(cè)区丑,與滲透進(jìn)入液滴膜外側(cè)的溶液氧接觸的機(jī)會極少,該體系能極大地提高維生素C的穩(wěn)定性修陡。
鄭京平等利用維生素C具有對紫外產(chǎn)生吸收和對堿穩(wěn)定的特性沧侥,建立了紫外分光光度快速測定水果、蔬菜維生素c的新方法魄鸦。根據(jù)維生素C具有對紫外產(chǎn)生吸收和對堿不穩(wěn)定的特性正什,于波長243nm處測定樣品溶液與堿處理樣品兩者吸光度之差啥纸,通過查校準(zhǔn)曲線,即可計算樣品巾維生素C的含量婴氮。此法操作簡單斯棒、快速準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好主经,結(jié)果令人滿意荣暮。特別適合含深色樣品的測定。實驗結(jié)果表明該方法簡單易行仇钞,結(jié)果準(zhǔn)確嗡窑、靈敏度高,檢出限低毯甘,可快速測定水果夭蹦、蔬菜中維生素C,值得推廣應(yīng)用沙书。
張立科等介紹了在0~450µg/mL線性范圍內(nèi)耳恭,以cu2+作催化劑,以溶解氧將還原型維生素C氧化為在246.0 nm處無吸收的氧化型Vc优学,實現(xiàn)了樣品各紫外干擾成分的本底校正叹惕,建立了種測定果蔬Vc的新方法。該方法中維生素C破壞條件的選擇尤為重要陡敞,確定條件為:Cu用量為30 g随巴,反應(yīng)溫度為70℃,反應(yīng)時間為20min掖沸,加熱條件下殖咨,反應(yīng)速度快,無需加掩蔽劑烛亦。方法簡便统翩、快速、準(zhǔn)確此洲,測定了香蕉厂汗、西紅柿等果蔬中的VC含量,結(jié)果令人滿意呜师。經(jīng)多次實驗得出該方法RsD在0.32%~0.89%之間娶桦,實際測定了香蕉、西紅柿等樣品中的VC的含量汁汗,檢出限為0.2791g/mL衷畦,加標(biāo)回收率在97.16%~100.18%之間 。
3高效液相色譜法
前面介紹的方法由于在使用中有一定的限制,操作復(fù)雜祈争、前處理較麻煩斤程。因此在使用中有較大的局限性,目的已逐漸被高效液相色譜法所取代菩混。HPLC法具有檢測速度快忿墅、操作簡單、實驗結(jié)果可靠等特點棍潜。
王艷穎恭吊,姜國斌等采用HYPERSIL-C8fz譜柱、濃度0.1%的草酸作流動相的高效液相色譜法针如,分析了草莓中的維生素c含量仓判,取得了理想的效果。HPLC檢測條件如下:
流動相0.1%草酸溶液艇泡,流速1.0 mL/min蜘体;檢測波長254 nm,進(jìn)樣量5µL广狂,柱箱溫度3O℃逮百。該方法分析中受樣品中其他雜質(zhì)的影響較小。測定草莓中維生素C的含量虾钾,回收率為97.4%~102.1%臊娩,說明該方法具有所需試劑少拐棺、穩(wěn)定透嫩、操作簡便等特點。精密度實驗的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3%察绷,說明該方法重復(fù)性和再現(xiàn)性都是比較高的干签。
陳昌云等采用0.05 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液:甲醇=80:20(v/v)作流動相。流速為1.0 mL/min拆撼,二極管陣列檢測器容劳,檢測波長為254 nm。測定蜜柚中維生素C含量在質(zhì)量濃度為20~100mg/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系闸度,方法回收率為92.4%~107.5%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2%竭贩。
4 結(jié)語
測定維生素C含量方法很多,各種方法各有優(yōu)缺點莺禁,因為維生素C自身的不穩(wěn)定留量,導(dǎo)致了很多方法測定結(jié)果誤差較大,所以對維生素C穩(wěn)定存在條件的探索非常重要哟冬。高效液相色譜法因為測定較準(zhǔn)確楼熄、靈敏度高、選擇性好,有較好的發(fā)展前景可岂,是目前發(fā)展較快的一種方法律馏。
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