李菲
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更新時間:2023-07-17 21:25:29瀏覽次數(shù):6695次
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水質(zhì)大腸菌群檢測紙片
目 錄 一、 適用范圍 二眉剿、 實驗前的準(zhǔn)備工作及操作中的注意事項 三、 生活飲用水微生物常規(guī)指標(biāo)及限值 四纲愁、 檢測流程圖 五团何、 菌落總數(shù)測試片使用說明 六、 飲用水大腸菌群檢驗紙片使用說明 七诫汇、 水質(zhì)大腸菌群檢驗紙片使用說明 八司型、 大腸菌群檢測試劑盒使用說明 九、 大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片使用說明 十爽篷、 致病菌檢測試劑盒使用說明 十一悴晰、沙門氏菌測試片使用說明 十二、金黃色葡萄球菌測試片使用說明 十三逐工、副溶血弧菌測試片使用說明 十四铡溪、大腸桿菌O157測試片使用說明 十五、阪崎腸桿菌測試片使用說明 十六泪喊、蠟樣芽胞桿菌測試片使用說明 一棕硫、適用范圍 適用于生活飲用水及其水源水中衛(wèi)生指標(biāo)菌與致病菌的日常監(jiān)測以及應(yīng)急檢測需要。 二袒啼、實驗前的準(zhǔn)備工作及操作中的注意事項 1 開展微生物快速檢測所需的基本條件 1.1 一間通風(fēng)良好哈扮、面積不需要很大的獨立房間,房間里備有紫外線消毒燈蚓再,洗手盆滑肉,實驗臺。應(yīng)急檢測時,臨時性的房間應(yīng)注意工作環(huán)境的的消毒(如采用84消毒液消毒等)靶庙,并備好酒精燈问畅。 1.2 一臺高壓鍋或紅外線消毒柜(家用消毒碗柜也可。)應(yīng)急檢測時轻樟,應(yīng)備好消毒液趴国,含氯消毒液的濃度在250ppm時,器皿消毒應(yīng)保持5分鐘以上舟门。 1.3 一臺小型恒溫培養(yǎng)箱债苍; 1.4 有條件時,配備一臺普通冰箱锅星,用于存放樣品咳铅; 1.5 水質(zhì)微生物采樣檢測箱,箱內(nèi)備有采樣用具與實驗用的一些工具和器皿家统; 1.6 檢測用試紙與試劑盒具椒。 2 移液器的消毒 2.1 移液器管頭的消毒:將管頭放入錫箔袋或用錫箔紙包好,放入民用紅外線消毒柜中消毒曹均;或?qū)⒐茴^放入消毒液中浸泡斧壮,取用時注意甩干消毒液并用無菌生理鹽水沖洗三次。 3. 無菌操作和注意事項 3.1點燃酒精燈纤悉,營造局部無菌環(huán)境蔬咬。取樣和加樣時盡量靠近酒精燈操作。能用火焰消毒的操作工具如鑷子沐寺、剪子林艘、長柄勺、小刀等應(yīng)在酒精燈上消毒后使用混坞。 3.2 用75%酒精棉球?qū)⑹帜ú料尽?/span> 3.3 廢棄物及時按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理 狐援。 三、生活飲用水微生物常規(guī)指標(biāo)及限值 根據(jù)國家生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(GB 5749—2006)究孕,常規(guī)的微生物指標(biāo)及限值如下:
MPN表示zui可能數(shù)啥酱;CFU表示菌落形成單位。當(dāng)水樣檢出總大腸菌群時厨诸,應(yīng)進(jìn)一步檢驗大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群懈涛;水樣未檢出總大腸菌群,不必檢驗大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群泳猬。 四批钠、檢測流程圖 五、菌落總數(shù)測試片使用說明 1 原理及適用范圍:菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理得封,在一定條件下培養(yǎng)后所得1mL(g)檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)了岸,是zui常用的檢測項目指標(biāo)颗屏。菌落總數(shù)測試片(Aerobic Count Plates BB202)是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品,含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基造蒋,冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑——氯化三苯基四氮唑(TTC)卑托,菌落在測試片上呈紫紅色或粉紅色,這樣可縮短計數(shù)時間和增強計數(shù)效果篱辫。本產(chǎn)品適合于食品及水中菌落總數(shù)的測定势粱,也可用于與食品接觸的容器操作臺和其他設(shè)備表面的衛(wèi)生檢測。 2 樣品處理與稀釋 2.1 生活飲用水:取充分混勻的水樣(原液)檢測彪珍。 2.2 水源水:以無菌操作方法吸取1mL充分混勻的水樣食土,注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi),混勻成1:10稀釋液屿拴。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL医熊,注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi),振搖后成為1:100的稀釋液笤茴,以此類推蚯唱,做出1:1000等稀釋度的稀釋液,每次換一支吸管涕癣。 2.3 食品:取樣品 25 mL(g)放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)哗蜈,充分混勻成1:10稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL坠韩,注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)恬叹,振搖后成為1:100的稀釋液,以此類推同眯,做出1:1000等稀釋度的稀釋液,每次換一支吸管唯鸭。 3 接種:將菌落總數(shù)測試片(BB202)置于實驗臺面须蜗,揭開上層膜準(zhǔn)備接種。生活飲用水目溉、純水和礦泉水取原液明肮,每個樣品做兩片;水源水以及食品選擇2~3個稀釋度進(jìn)行檢測缭付,每個稀釋度同時應(yīng)做一平行接種柿估。以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL混勻的樣品液,慢慢均勻地滴加到測試片上陷猫,然后再將上層膜緩慢蓋下撰绕,靜置5 min使培養(yǎng)基凝固,zui后用手輕輕地壓一下在轮。每次檢測牺幻,同時將1mL滅菌生理鹽水滴加到另一片測試片上作為空白對照复罕。 4 培養(yǎng): 將測試片疊在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)魂拢,堆疊片數(shù)不超過12片塑业。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃,培養(yǎng)15~24h觀察結(jié)果镜踪。 5 結(jié)果判讀: 細(xì)菌在測試片上生長后會顯示紅色斑點低柑,選擇菌落數(shù)適中(10~100個)的測試片進(jìn)行計數(shù),乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升(克)樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)眶约。作菌落計數(shù)時汉统,可用眼睛直接觀察,必要時用放大鏡檢查逐会,以防遺漏族延。在記下各測試片菌落數(shù)后,應(yīng)求出同稀釋度的平均菌落數(shù)献酗,供下一步計算時用寝受。 6 計數(shù)原則及報告方式 6.1通常選擇菌落在10~100個之間的測試片進(jìn)行計數(shù),乘以稀釋倍數(shù)報告之(見表1實例1)罕偎。 6.2若有兩個稀釋度的菌落數(shù)在10~100個之內(nèi)很澄,兩者的比值小于2,則取其平均數(shù)颜及,若大于2甩苛,則用值小者(見表1實例2、例3)俏站。 6.3若三個稀釋度的菌落數(shù)都有在10~100個之內(nèi)讯蒲,應(yīng)選擇二個低數(shù)值的平均數(shù)(見表1實例4)。 6.4若三個稀釋度的菌落數(shù)均小于10個或大于100個時肄扎,應(yīng)重新試用更低或更高的稀釋度進(jìn)行菌落計數(shù)词身;或采用均小于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui小值装魁,或采用均大于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui大值(見表1實例5、例6)。 6.5若所有稀釋度的測試片均無生長绞艘,以未檢出報告之继谚。菌落數(shù)在100以內(nèi)時按實有數(shù)報告逛指,大于100時萨宙,采樣兩位有效數(shù)字,在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值橘匿,以四舍五入方法計算儡矫,為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用10的指數(shù)來表示。 表1 稀釋度選擇及菌落總數(shù)報告方式
7 表面取樣方法:加1mL滅菌生理鹽水在測試片上搏贤,靜置至少1h使培養(yǎng)基凝固;提起上層膜桨檬,使中央濾紙部分貼到待測物表面匿胎,用手在外側(cè)輕壓;然后將上蓋膜合上众凝,置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)公垒。 六、飲用水大腸菌群檢驗紙片使用說明(五管法) 1 適用范圍:適用于飲用水中總大腸菌群的快速檢驗倍工。 2 方法原理:將乳糖队魏、顯色劑和選擇性培養(yǎng)基加載在紙片上,經(jīng)培養(yǎng)后能夠在紙片上生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸的即為大腸菌群陽性万搔,記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數(shù)胡桨,根據(jù)大腸菌群MPN表查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。 3操作方法 3.1用滅菌吸管吸取10mL水樣插入裝有大紙片的塑料薄膜袋中瞬雹,均勻涂布昧谊,共做5個重復(fù); 3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中酗捌,36℃±1℃呢诬,培養(yǎng)15~24h觀察結(jié)果。 3.3觀察每片顏色變化胖缤,若紙片保持紫藍(lán)色不變?yōu)榇竽c菌群陰性尚镰,紙片變黃或在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點或片狀紅暈為大腸菌群陽性。 3.4根據(jù)陽性反應(yīng)紙片數(shù)哪廓,查MPN表得出水樣中總大腸菌群的MPN值(見表2)狗唉。如所有紙片均為陰性時,可報告總大腸菌群未檢出涡真。 3.5 對于陽性紙片音哟,應(yīng)進(jìn)一步檢驗大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群。用無菌鑷子在陽性菌斑處挑取少許帶菌濾紙匠凤,用3mL無菌水混勻,接種到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片上衡孽,進(jìn)行44.5℃培養(yǎng)和檢驗厂跋。 表2 用5份10mL水樣時各種陽性和陰性結(jié)果組合時的zui可能數(shù)(MPN)
七、水質(zhì)大腸菌群檢驗紙片使用說明(十五管法) 1 適用范圍:適用于水源水中總大腸菌群的快速檢驗谨寂。 2 方法原理:將乳糖猫降、顯色劑和選擇性培養(yǎng)基加載在紙片上,經(jīng)培養(yǎng)后能夠在紙片上生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸的即為大腸菌群陽性脆携,記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數(shù)淫沧,根據(jù)大腸菌群MPN表查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)豌魏。 3操作方法 3.1 用滅菌吸管吸取10mL水樣插入裝有大紙片的塑料薄膜袋中,均勻涂布院抛,共做5個重復(fù)唉私;分別取1mL水樣加到小紙片中,共接5個重復(fù)染突;另取1mL水樣加到9mL無菌水中混勻捻爷,用1mL滅菌吸管分別吸取1mL(即0.1mL水樣),加到zui后5片小紙片中。 3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中份企,36℃±1℃也榄,培養(yǎng)15~24h觀察結(jié)果。 3.3 觀察每片顏色變化司志,若紙片保持紫藍(lán)色不變?yōu)榇竽c菌群陰性甜紫,紙片變黃或在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點或片狀紅暈為陽性。 3.4 根據(jù)每個稀釋度的陽性反應(yīng)紙片數(shù)骂远,查MPN表(表3)可得出水樣中總大腸菌群的MPN值囚霸。 3.5 對于陽性紙片,應(yīng)進(jìn)一步檢驗大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群吧史。用無菌鑷子在陽性菌斑處挑取少許帶菌濾紙邮辽,用3mL無菌水混勻,接種到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片上贸营,進(jìn)行44.5℃培養(yǎng)和檢驗吨述。 八、總大腸菌群檢測試劑盒使用說明 1.適用范圍:適用于二次供水钞脂、自來水阅王、水源水、生活飲用水狡煎、礦泉水等樣品中總大腸菌群檢測培扳。對污染較嚴(yán)重的樣品采用十五管法,其它可采用五管檢測法瞧纹。 2.方法原理:與國標(biāo)法相同硫薇。事先將乳糖蛋白胨培養(yǎng)基雙料、乳糖蛋白胨培養(yǎng)基單料濃縮至試劑盒培養(yǎng)孔中澳券,隨時取用但治。 3.操作方法: 3.1十五管法:用無菌吸管吸取5個10mL水樣分別加入到試劑盒1號~5號5個大發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)。吸取5個1mL水樣分別加入到試劑盒7號~11號5個小發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)乎渊。吸取5個用滅菌生理鹽水稀釋后的1:10稀釋液1mL加入到試劑盒12號~16號小發(fā)酵培養(yǎng)基孔內(nèi)习诬。余孔可做對照。 3.2 五管法: 用無菌吸管吸取5個10mL水樣分別加入到試劑盒1號~5號5個大發(fā)酵培養(yǎng)基管(孔)內(nèi)崩蚀。余孔可做對照零短。 3.3 排氣泡:加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在壤趴,可將試劑盒以30~45度角傾斜使氣泡排出,必要時可輕輕用力在桌面上敲擊數(shù)次排出氣泡瑞侮。 3.4 培養(yǎng):將加樣后的試劑盒置36℃± 1℃溫箱中的圆,培養(yǎng)18h~24h。 3.5 觀察結(jié)果:樣液變?yōu)辄S色為產(chǎn)酸区岗、集氣窗中有氣泡為產(chǎn)氣略板,產(chǎn)酸產(chǎn)氣者為陽性結(jié)果,可根據(jù)試劑盒的陽性管數(shù),參照國標(biāo)GB/T5750.12-2006的方法慈缔,查表 MPN檢索表(表2或 表3)叮称,報告每100mL水樣中的總大腸菌群zui可能數(shù)。如需對陽性結(jié)果進(jìn)一步證實藐鹤,可參考GB/T5750.12-2006方法進(jìn)行瓤檐。如所有管數(shù)均為陰性時,可報告總大腸菌群未檢出娱节。 4. 注意事項: 4.1加入樣品后不需搖勻挠蛉,平拿平放。 4.2 加樣時可用一次性無菌塑料吸管肄满,將樣品稀釋液加至試劑盒所標(biāo)刻度處谴古。 4.3 在培養(yǎng)箱中取試劑盒時應(yīng)平托出來,不要傾斜以免由于試劑盒的傾斜將陽性管集氣窗中的氣泡排出而影響結(jié)果拭兢。 4.4 試劑盒為一次性無菌用品少镇,供一次性使用。 表3 十五管法總大腸菌群(MPN)檢索表 (總接種量55.5 mL孟掺,其中5份10 mL水樣效荷,5份1mL水樣,5份0.1 mL水樣)
續(xù)表
續(xù)表
九搏翎、大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片使用說明 1.適用范圍:適用于各種水樣中大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群的快速檢驗 2.方法原理:耐熱大腸菌群(thermotoletant coliform bacteria)是總大腸菌群的一部分.將培養(yǎng)溫度提高到44~45℃谊蚣,在此條件下仍能生長和發(fā)酵乳糖的菌群被稱為耐熱大腸菌群。它們由埃希氏菌屬以及克雷伯菌屬沐恨、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬中的一些菌種組成物忠。其中大腸埃希氏菌(E.coli) 是zui準(zhǔn)確和專一的糞便污染指示菌婚被。與總大腸菌群相比狡忙,耐熱大腸菌群在水體中的檢出梳虽,說明水體更為不清潔,存在腸道致病菌和食物中毒菌的可能性更大灾茁。大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片運用酶底物技術(shù)窜觉,含有大腸埃希氏菌*葡萄糖醛酸酶(glucuronidase)的顯色底物(XGLUC/blue),以及耐熱大腸菌群半乳糖苷酶(galactosidase)的顯色底物(SalmonGal/red),經(jīng)過44.5℃培養(yǎng)后北专,大腸埃希氏菌顯紫藍(lán)色禀挫,紅色或紫藍(lán)色菌斑都屬耐熱大腸菌群。 3操作方法 3.1對于大腸菌群檢驗顯示陽性的紙片或產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管拓颓,用接種環(huán)挑取菌液语婴,轉(zhuǎn)入2-3mL無菌水中混勻,用滅菌吸管吸取1mL慢慢均勻地滴加到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片上驶睦,然后放下上層膜砰左,靜置5 min使培養(yǎng)基凝固,zui后用手輕輕地壓一下场航。 3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中缠导,44.5℃培養(yǎng)15~24h觀察結(jié)果。 4 結(jié)果判讀: 測試片上出現(xiàn)紅色或紫藍(lán)色菌斑都是耐熱大腸菌群陽性呼笨,其中紫藍(lán)色為大腸埃希氏菌陽性恋晃。沒有紅色或紫藍(lán)色斑點為陰性結(jié)果。 十肪吁、致病菌檢測試劑盒使用說明 1適用范圍:適用于生活飲用水陷立、水源水及食品中致病性沙門氏菌、金黃色葡萄球菌届审、副溶血弧菌胀垃、致瀉大腸埃希氏菌(含腸出血性大腸桿菌O157:H7)、臘樣芽孢桿菌噪旭、板奇腸桿菌檢測的檢測以及大腸菌群污染程度的檢測据滑。 2方法原理:依據(jù)國標(biāo)GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法,采用包被技術(shù)將相對應(yīng)培養(yǎng)基包被在試劑盒底部垢蔑,隨時取用培晓。 3樣品稀釋:同國標(biāo)法。液體樣品取原液菩擦。固體或半固體樣品用滅菌生理鹽水配制成1:10和1:100的稀釋液廓握。 4致病菌檢測 4.1加樣:用滅菌吸管吸取原液或1:10樣品稀釋液4ml~10 ml(不得少于4ml)分別加入到標(biāo)號為1、2嘁酿、3隙券、A、B、C的增菌格(孔)內(nèi)娱仔。加樣后的1沐飘、2、3號分別為副溶血弧菌牲迫、致瀉大腸埃希菌耐朴、板奇腸桿菌增菌液;A盹憎、B筛峭、C分別為金黃色葡萄球菌、沙門菌陪每、臘樣芽孢桿菌增菌液影晓。 4.2培養(yǎng):將加樣后的試劑盒蓋上蓋,平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18小時檩禾。 4.3 觀察結(jié)果:如果某致病菌的增菌液發(fā)生渾濁绍掂,即預(yù)示含有此種致病菌≈游ǎ可按國標(biāo)法進(jìn)一步檢測识俄。也可取陽性菌液1mL,加入到含有9 mL滅菌生理鹽的試管內(nèi)焚痰,混勻纫蝗,取1mL,接種到相對應(yīng)的測試片上盯萄,36℃±1℃培養(yǎng)18小時加以驗證仇韩。 5大腸菌檢測 5.1加樣:將試劑盒放在試驗臺面上,打開盒蓋用牲,用滅菌吸管分別吸取3個原液或1:10樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號為4塌纯、5、6的小培養(yǎng)基孔內(nèi)勋酿。另用滅菌吸管分別吸取3個1:10或1:100的樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號為7隆肪、8、9的小培養(yǎng)基孔內(nèi)博个,標(biāo)號為10的小培養(yǎng)基孔內(nèi)可加入1ml滅菌生理鹽水作為培養(yǎng)基陰性對照孔使用怀樟。 5.2排氣泡:加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在,可將試劑盒以30~45度角傾斜使氣泡排出盆佣,必要時可輕輕用力在桌面上敲擊數(shù)下排出氣泡往堡。 5.3培養(yǎng):將加樣后的試劑盒蓋上蓋,平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18~24小時共耍。 5.4觀察結(jié)果:樣液變?yōu)辄S色為產(chǎn)酸虑灰、集氣窗中有氣泡為產(chǎn)氣吨瞎,產(chǎn)酸產(chǎn)氣者為陽性結(jié)果,陽性結(jié)果的孔數(shù)越多穆咐,說明污染越嚴(yán)重关拒。 6 注意事項 6.1致病菌檢測與大腸菌檢測可同時進(jìn)行;加入樣品后不需搖勻庸娱;大腸菌檢測培養(yǎng)前一定要排氣泡,排氣泡的方法與結(jié)果觀察可參見www.bjzw.com中大腸菌試劑盒使用說明中的圖像顯示谐算;在培養(yǎng)箱中取試劑盒時注意平托出來熟尉,避免由于試劑盒的傾斜使大腸菌陽性集氣窗中的氣泡流失而影響結(jié)果判斷。 6.2試劑盒為一次性無菌包裝用品佳抗,供一次性即開即用坠街,。 7 保存條件和有效期:避光保存于陰涼干燥處灵科,溫度為2~8℃墅失,有效期18個月。 十一揭轰、沙門氏菌測試片使用說明 1適用范圍及原理:適用于生活飲用水筑渴、水源水及食品等中沙門氏菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。沙門氏菌屬腸道細(xì)菌科少炎,包括那些引起食物中毒磕阱、導(dǎo)致腸胃炎、傷寒和副傷寒的細(xì)菌峡审。能引起食物傳播性疾病情澈,近年來,已經(jīng)成為zui常見的食物中毒原因拨聚。腸炎沙門氏菌感染通常源于奶制品瘤琐、禽產(chǎn)品和肉產(chǎn)品;雞肉和雞蛋尤其是高風(fēng)險食品丑瞧。沙門氏菌感染的癥狀通常是腸胃出現(xiàn)問題柑土,包括惡心、腹部絞痛绊汹、嘔吐和腹瀉冰单,一般zui多持續(xù)7天。在免疫力低下的人群中灸促,如果不及時服用抗生素類藥品诫欠,沙門氏菌感染將導(dǎo)致生命危險。沙門氏菌測試片(Salmonella Count Plate BS205)含有選擇性培養(yǎng)基浴栽、沙門氏菌*辛酯酶的顯色指示劑和高分子吸水凝膠荒叼,運用微生物測試片專有技術(shù)轿偎,做成一次性快速檢驗產(chǎn)品,一步培養(yǎng)15-24h就可確認(rèn)是否帶有沙門氏菌被廓。 2 操作方法 2.1 樣品處理:生活飲用水及其水源水取原液坏晦。其他樣品取 25g(mL)放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi),制成1:10的樣品勻液嫁乘。 2.2 接種:將沙門氏菌測試片(BS205)置于平坦實驗臺面昆婿,揭開上層膜,用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上永努,然后再將上層膜緩慢蓋下贞倒,靜置5 min使培養(yǎng)基凝固,zui后用手輕輕地壓一下散苦,每個樣品接種兩片紫颈。 2.3 培養(yǎng): 將測試片疊在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)奇嗽,堆疊片數(shù)不超過12片嘁汗。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃,培養(yǎng)15~24h永音。 3 結(jié)果判讀: 對測試片進(jìn)行觀察揣恳,呈紫紅色的菌落為沙門氏菌;呈藍(lán)色的菌落為其他菌群炭箭。出現(xiàn)陽性菌落的樣本继韵,用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗證,沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次胆誊。 4 附加說明 4.1有關(guān)驗證試驗表明一死,接純菌種(包括硫化氫陰性菌株)可以產(chǎn)生典型的紫紅色菌斑,其他腸桿菌呈藍(lán)色傻唾,葡萄球菌不生長投慈。 4.2測試片具有較強的敏感性,在1.5×10-8稀釋時仍可計算出菌落冠骄。臨床實際應(yīng)用結(jié)果顯示陽性檢出率高于分離培養(yǎng)法1.84‰伪煤,復(fù)查準(zhǔn)確率提高約13.0%(中國衛(wèi)生檢驗雜志2006,16(8):954-955.)。 4.3注意使用過的測試片上帶有活菌凛辣,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理 抱既。 十二、金黃色葡萄球菌測試片使用說明 1適用范圍及原理:適用于生活飲用水扁誓、水源水及食品等中金黃色葡萄球菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要防泵。金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus簡稱金葡菌)是人類zui常見的致病菌之一,其侵襲力很強蝗敢,能產(chǎn)生多種致病物質(zhì)如:腸毒素捷泞、凝固酶等足删;可引起化膿性炎癥、毒素性疾病及葡萄球菌性腸炎锁右。金葡菌所引起的中毒事件已成為世界性的公共衛(wèi)生問題搜痕,我國每年由金葡菌引起的食物中毒事件屢有報道。金黃色葡萄球菌測試片(Staph Count Plate BT206)含有選擇性培養(yǎng)基和專一性的酶顯色劑队趁,運用微生物測試片專有技術(shù)绍撇,做成一次性快速檢驗產(chǎn)品,一步培養(yǎng)15-24h就可確定出病原菌的存在松摘。 2 操作方法 2.1 樣品處理::生活飲用水及其水源水取原液督垮。其他樣品取 25g(mL)放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi),制成1:10的樣品勻液巴俯。 2.2 接種:將金黃色葡萄球菌測試片(BT206)置于平坦實驗臺面,揭開上層膜钾抛,用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上漏炕,然后再將上層膜緩慢蓋下,靜置5 min使培養(yǎng)基凝固衣夏,zui后用手輕輕地壓一下扭享,每個樣品接種兩片。 2.3 培養(yǎng): 將測試片疊在一起放回原自封袋中匙蚣,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)续膳,堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃收班,培養(yǎng)15~24h坟岔。 3 結(jié)果判讀:紫紅色的菌落為金黃色葡萄球菌;呈藍(lán)色的菌落為其他大腸菌群摔桦。出現(xiàn)陽性菌落的樣本社付,用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗證,沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次邻耕。 4 附加說明 4.1有關(guān)驗證試驗表明鸥咖,金黃色葡萄球菌測試片接純菌種可以產(chǎn)生典型的紫紅色菌斑,普通大腸桿菌呈藍(lán)色菌落兄世,而沙門氏菌啼辣,變形桿菌在測試片上不生長。測試片的敏感度為1.2×10-8御滩。通過檢測211份糕點鸥拧、熟肉、鮮肉和奶制品樣品削解,測試片法和國標(biāo)法的陽性率分別為10.43%和7.58%(中國衛(wèi)生檢驗雜志2007候妻,17(8):1456-1457.)锨耍。 4.2山東省疾病預(yù)防控制中心的驗證結(jié)果表明,當(dāng)金黃色葡萄球菌在0~9個菌落范圍內(nèi)時柒拌,測試片與血平板均能檢出平俩,作為致病菌不得撿出的標(biāo)準(zhǔn)要求,可以作為金黃色葡萄球菌檢驗應(yīng)用脉裕。 4.3注意使用過的測試片上帶有活菌泡缠,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理 。 十三邪船、副溶血弧菌測試片使用說明 1適用范圍及原理:適用于生活飲用水鼎示、水源水及食品等中副溶血弧菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一種廣泛分布于海洋與鹽湖中的嗜鹽性細(xì)菌羔峭,海產(chǎn)品中常有此菌虫店,它是引起食源性疾病的主要病原之一,是夏缅钠、秋季沿海地區(qū)食物中毒和急性腹瀉的重要病原愁霞。據(jù)國家食源性疾病監(jiān)測網(wǎng)統(tǒng)計,我國近年由副溶血弧菌引起的食物中毒呈顯著上升趨勢熬甫,已成為我國一個嚴(yán)重的食源性公共衛(wèi)生問題之一胰挑。該菌引起的食物中毒臨床上表現(xiàn)為:上腹部疼痛、腹瀉椿肩、惡心瞻颂、嘔吐、發(fā)熱等郑象,腹瀉多為水樣便贡这,亦有大便膿血,隨后腹部劇烈疼痛厂榛,持續(xù)1-2天藕坯。副溶血弧菌測試片(BH209)是一種商品化的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品,含有高選擇性培養(yǎng)基噪沙、吸水凝膠和特異酶指示劑等重要成分炼彪,培養(yǎng)15~24小時就可確認(rèn)是否有病原菌的存在。 2 操作方法 2.1 樣品處理::生活飲用水及其水源水取原液正歼。其他樣品取 25g(mL)放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)辐马,制成1:10的樣品勻液。 2.2 接種:將副溶血弧菌測試片(BH209)置于平坦實驗臺面脖耽,揭開上層膜蔚芥,用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上,然后再將上層膜緩慢蓋下京多,靜置5 min使培養(yǎng)基凝固秤皿,zui后用手輕輕地壓一下基际,每個樣品接種兩片。 2.3 培養(yǎng): 將測試片疊在一起放回原自封袋中办溶,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)袍砚,堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃抠阴,培養(yǎng)15~24h槐伍。 3 結(jié)果判讀: 呈紫紅色的菌落為副溶血弧菌。多數(shù)非目的菌在測試片上不生長粥割,少數(shù)能生長凌红,如創(chuàng)傷弧菌和霍亂弧菌,但菌落呈藍(lán)色突妇,明顯區(qū)別于目的菌硬纤。出現(xiàn)陽性菌落的樣本,用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗證赃磨,沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次筝家。 4 附加說明 4.1 汕頭出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心的對比試驗結(jié)果表明,副溶血弧菌測試片具有較高的檢測靈敏度和準(zhǔn)確性煞躬,對純菌的檢測靈敏度達(dá)到8cfu/mL肛鹏,與SN標(biāo)準(zhǔn)方法符合率達(dá)到90%以上逸邦。 4.2 注意使用過的測試片上帶有活菌恩沛,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理 。 十四缕减、大腸桿菌測試片使用說明 1適用范圍及原理:適用于生活飲用水雷客、水源水及食品等中大腸桿菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要。腸出血性大腸桿菌O157:H7是一種新出現(xiàn)的食物傳播性疾病的病因桥狡。它除引起腹瀉搅裙、出血性腸炎外,還可發(fā)生溶血性尿毒綜合癥裹芝、血栓性血小板減少性紫癜等嚴(yán)重的并發(fā)癥部逮。自1982年美國*發(fā)現(xiàn)因該致病菌引起的食物中毒以來,腸出血性大腸桿菌O157:H7疫情開始逐漸擴散和蔓延臀匹,相繼在英國讲幌、加拿大山叮、日本等多個國家引起腹瀉爆發(fā)和流行翔悠。我國已陸續(xù)有十余個省份在市售食品、進(jìn)口食品赐罪、腹瀉病患者恃藐、家畜家禽等分離到大腸桿菌O157:H7眶蹈。大腸桿菌測試片(BO204)采用進(jìn)口高選擇性培養(yǎng)基作為主要原料藤棕,加入特異性酶顯色劑,運用微生物測試片專有技術(shù)雹了,做成一次性快速檢驗產(chǎn)品朴树,一步培養(yǎng)15~24h就可確認(rèn)。 2 操作方法 2.1 樣品處理:生活飲用水及其水源水取原液袖指。其他樣品取 25g(mL)放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)肪援,制成1:10的樣品勻液。 2.2 接種:將大腸桿菌測試片(BO204)置于平坦實驗臺面熟什,揭開上層膜堕义,用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上,然后再將上層膜緩慢蓋下脆栋,靜置5 min使培養(yǎng)基凝固倦卖,zui后用手輕輕地壓一下,每個樣品接種兩片椿争。 2.3 培養(yǎng): 將測試片疊在一起放回原自封袋中怕膛,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),堆疊片數(shù)不超過12片秦踪。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃褐捻,培養(yǎng)15~24h。 3 結(jié)果判讀: 對測試片進(jìn)行觀察椅邓,呈紫紅色的菌落為大腸桿菌O157:H7柠逞;呈藍(lán)色的菌落為其他大腸菌群。出現(xiàn)陽性菌落的樣本景馁,用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗證板壮,沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次。 4 附加說明 4.1本品所用培養(yǎng)基已在國外得到比較廣泛的應(yīng)用合住,有關(guān)驗證試驗表明僵卿,接純菌種可以產(chǎn)生典型的紫紅色菌斑,靈敏度達(dá)到98%(K.A. Betheim. 1998. J. Clin. Microbiol. 85:425-428)释何。 4.2本公司檢測大腸桿菌O157測試片對純菌的檢測靈敏度為0.5 cfu/mL正庙,3次試驗結(jié)果測試片與平皿的符合率平均達(dá)到96.3%。 4.3注意使用過的測試片上帶有活菌坯肿,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理 蓄扳。 十五、阪崎腸桿菌測試片使用說明 1 適用范圍:適用于生活飲用水梭甸、水源水及食品等中阪崎腸桿菌的檢測以及突發(fā)事件應(yīng)急需要踏拓。 2 方法原理:測試片是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品,由阪崎腸桿菌選擇性培養(yǎng)基、吸水凝膠和特異性酶顯色劑等組成韩烹,一步培養(yǎng)15~24小時就可確定出目標(biāo)菌的存在淑停。 3操作方法 3.1樣品處理:生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g(mL)放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)酿势,制成1:10的樣品勻液锰抡。 3.2接種:將測試片置于平坦實驗臺面,揭開上層膜互艾,用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上试和,然后再將上層膜緩慢蓋下,靜置5 min使培養(yǎng)基凝固纫普,zui后用手輕輕地壓一下阅悍。每個樣品接種2片。 3.3 培 養(yǎng): 將測試片疊在一起放回原自封袋中昨稼,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)节视,堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃假栓,培養(yǎng)15~24h寻行。 3.4 結(jié)果判別: 對測試片進(jìn)行觀察,呈藍(lán)綠色的菌落為阪崎腸桿菌匾荆。對于出現(xiàn)陽性菌落的樣品拌蜘,用其他方法作進(jìn)一步的鑒定。 4 附加說明 4.1阪崎腸桿菌純菌株產(chǎn)生典型的藍(lán)綠色點牙丽,接種一些腸道菌如大腸桿菌简卧、腸炎沙門氏菌等時,一加樣下去就會出現(xiàn)有紫色的點或暈狀朵椿,此為產(chǎn)品本身顯色劑的原因佳跃,不影響產(chǎn)品的使用和結(jié)果判讀怠义;而金黃色葡萄球菌俭宁、大腸桿菌O157和副溶血性弧菌等均被抑制。 4.2本法還可應(yīng)用于從業(yè)人員體檢陷母、中毒樣品和物體表面的檢測贷营,用取樣棉簽涂抹被測物體表面,放入裝有3mL滅菌生理鹽水的試管中尿欲,搖晃10s诬粗,然后取1mL接種到測試片上。 4.3注意使用過的測試片上帶有活菌溜舷,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理 扯凫。 十六、蠟樣芽胞桿菌測試片使用說明 1 適用范圍:適用于生活飲用水开摄、水源水售拼、食品以及人體體檢樣品中蠟樣芽胞桿菌的檢測且昭。以及突發(fā)事件應(yīng)急檢測需要。 2方法原理:采用一種商品化的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品贱鼻,含有高選擇性培養(yǎng)基宴卖、吸水凝膠和特異酶指示劑等重要成分,培養(yǎng)15~24小時就可確認(rèn)是否有目標(biāo)菌的存在邻悬。 3操作方法 3.1樣品處理:生活飲用水及其水源水取原液症昏。其他樣品取 25g(mL)放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi),制成1:10的樣品勻液父丰。 3.2接種:將測試片置于平坦實驗臺面肝谭,揭開上層膜,用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上蛾扇,然后再將上層膜緩慢蓋下分苇,靜置5 min使培養(yǎng)基凝固,zui后用手輕輕地壓一下屁桑。每個樣品接種2片医寿。 3.3培 養(yǎng): 將測試片疊在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)蘑斧,堆疊片數(shù)不超過12片靖秩。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃,培養(yǎng)15~24h堡喳。 3.4結(jié)果判別:對測試片進(jìn)行觀察件父,蠟樣芽胞桿菌產(chǎn)生典型的藍(lán)綠色點,而大部分非目標(biāo)菌如大腸桿菌祸播、大腸桿菌O157夹它、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌遭唠、副溶血性弧菌和阪崎腸桿菌等均被抑制恢儡。 4附加說明 4.1本法還可應(yīng)用于從業(yè)人員體檢、中毒樣品和物體表面的檢測颊姻,用取樣棉簽涂抹被測物體表面组莲,放入裝有3mL滅菌生理鹽水的試管中,搖晃10s矫恳,然后取1mL接種到測試片上咒饼。 4.2注意使用過的測試片上帶有活菌,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理 刮赵。 4.3出現(xiàn)陽性菌落的樣本渔硫,用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗證,沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次。 |
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