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技術(shù)文章

GE percoll分離液17-0891-01幾大優(yōu)勢

點擊次數(shù):1237 發(fā)布時間:2018-12-28

GE percoll分離液17-0891-01幾大優(yōu)勢

優(yōu)勢一:

 在溫和的條件下,分離細(xì)胞、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和較大的病毒分子(可小至~70S),保持其存活和形態(tài)的完整性

優(yōu)勢二:

對細(xì)胞無毒性

優(yōu)勢三:

可調(diào)整到生理狀態(tài)下的離子強度和pH

優(yōu)勢四:

使用角轉(zhuǎn)頭,以中速離心妨宪,即可形成梯度

等滲梯度,密度zui大可達(dá)到1.3 g/ml帖奠。

操作方法及注意事項
  1.不同濃度(密度)Percoll溶液的制備: 先用9份Percoll與1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合達(dá)到生理性滲透壓之灼,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀釋到所需濃度。
 Percoll濃度(%)  70    60    50    40    30     20
  比重g/ml    1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031
2.不連續(xù)密度梯度Percoll層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤创邦,除去多余血清比紫,這種預(yù)處理可使逐層疊加的Percoll液平穩(wěn)沿管壁流下,使形成滿意的界面丝您。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置蕾捣,有時相鄰兩層Percoll比重相差不大時,可將Percoll液放入注射器中但珍,小針頭斜面緊貼管壁齐寻,任其自然慢慢流下。
3.裝樣:樣品體積和細(xì)胞濃度根據(jù)不同細(xì)胞而異绎术,一般加樣體積不宜過大刨吸,細(xì)胞濃度也不可過高,否則會影響細(xì)胞的分離和回收蟋软。
4.離心:一般采用離心力為400g镶摘,時間20~25min嗽桩。由于多層Percoll之間密度差別不大岳守,因此離心機(jī)加速、降速時要慢碌冶,要平穩(wěn)湿痢。
5.取樣:當(dāng)所要分離的細(xì)胞絕大部分在兩層的界面時,可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細(xì)胞;有時大部分細(xì)胞位于Percoll層中,則需要逐層收集扑庞。收獲含有Percoll液的細(xì)胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測用譬重。

 

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